琼扩板中间孔加入阳性血清,外周孔分别的加入待检样品、阳性对照、阴性对照等,湿盒培养72小时,24小时观察可见中间孔的阳性血清与待检样品与阳性对照间出现明显的沉淀线,与阴性对照之间没有出现沉淀线。
3 分子生物学检测
(1)从处理样品中,采用试剂盒提取RNA,设计I亚群C-4型腺病毒(Hexon蛋白)引物,利用一步法进行PCR检测,1%琼脂糖凝胶电泳,成像系统显示待检样品中含有I亚群C-4型腺病毒(Hexon蛋白)目的性基因片段(见图3)。
(2)测序分析
对待检样品的PCR产物送大连宝生物进行基因测序分析(见图4)。
4 结论
(1)送检样品通过病毒分离没有检测到有血凝性的病毒。
(2)送检样品通过AGP试验:待检样品与IBH-I亚群阳性血清出现明显的沉淀线。
(3)送检样品通过RT-PCR检测出现I亚群C-4型的目的性基因片段,经测序分析为I亚群-C-4型腺病毒。
六、防控:
对于本病的治疗,抗病毒药物效果不理想。使用康复鸡的卵黄抗体和抗血清注射效果明显,很快就能控制死亡,这有待进一步探讨。从根本防控还是要通过疫苗预防才能对本病进行控制。据有关专家介绍说用自家组织灭活苗进行紧急接种能明显降低死亡率。防控本病还是要疫苗预防应从种鸡入手,因为本病可通过垂直传播,在产蛋前注射一次疫苗有利于控制垂直传播的问题。在肉雏鸡,据巴基斯坦经验,在15~18日龄免疫注射效果好,在10日龄和20日龄进行二次免疫效果更佳。由于本病已在社会引起广泛流行,且造成一定影响,所以,国家相关部门有必要及早研制出心包积水-肝炎综合征疫苗,来预防本病的发生。
七、治疗思路探讨:
本病最可靠的治疗方法就是注射本病的抗血清和卵黄抗体!但与传染性法氏囊炎(IBD)一样,注射后10天可能会复发,需要重新注射。或者在注射抗体的同时使用药物辅助控制方案。在药物治疗方面,通过一些方法应该能有缓解作用。在这里我提出我的一些看法:
1、心包积液肝炎综合征卵黄抗体的使用:唯一能够杀灭本病毒的药物是其抗体!通过制备安卡拉病的卵黄抗体和抗血清,直接注射到发病鸡机体可以制止本病的继续蔓延和发病。
2、抗病毒措施:发病之初可以使用干扰素以抑制病毒复制,同时使用黄连解毒散、小柴胡散等来抗瘟袪邪,扶正解毒,清热凉血,疏肝和胃、和解少阳、补益肝气。提高机体免疫力,增强抗病力,促进康复之功效,
3、保肝护肾:由于本病会出现肝肾肿大、色泽变黄等炎症的变化,肯定会对肝肾功能造成影响,因此保肝护肾就很有必要。使用葡萄糖、维生素C、葡萄糖醛内脂、龙胆泻肝汤、五苓散等会对本病有一定的作用。
4、强心利尿:由于本病出现心包积液,说明心脏和血液循环发生问题。经检查心包积液主要是有清凉很可能会有急性心包炎或胶体渗透压降低的问题,导致血液中的水分向组织间液渗出,导致肝水肿、心包积液等。因此,需要通过使用强心药物来维持心脏功能,通过使用高效利尿药来消除组织间液的水分而缓解心包积液和肝肾水肿。可以使用地高辛、牛磺酸、樟脑磺酸钠、安钠咖来强心,使用布美他尼、呋塞米等利尿药利尿来缓解心包积液、肝肾水肿、肺水肿等现象,只鸡布美他尼1片,呋塞米10片,同时可另外加用ATP、肌苷、辅酶A等补充能量。
5、轻开肺气、健脾益肾、利水消肿、扶正固本:本病从中医辨证上看,我认为应为疫疬之气,但本戾气必挟有湿热之气入体(或者说,本戾气以湿热之气为主),湿热病初,以湿为主,湿遏热伏,热蕴湿中,湿热郁蒸,而上蒙清窍,证见心包积液。同时侵犯肺卫,导致肺气不宣,湿蒙肺窍。而湿为阴邪,重浊粘滞,卫气不宣,证见恶寒发热,身热不扬、头身沉重,所以会出现一发病就精神沉郁,头身沉重,瘫痪卧床。湿热逐渐入里,则脾更虚,脾越虚运化则更无力,湿更滞,湿越滞脾更困也,互为因果,形成恶性循环,缠绵日久,难解难移。脾困肺郁,水汽不能散布,湿热循经入络,热入心包,直入心窍更甚。我认为治疗应考虑上焦、中焦、下焦兼顾。中焦健脾以增强运化之力,运化力强,运化水湿于全身,在这方面脾是发动机;轻开上焦肺气,解除肺郁,以利其气化之功,气化则湿化;肾主水,益肾、加强行水之功以消水肿。具体用药可采用三仁汤、四君子汤、五苓散为基础方搭配即可。
6、加强饲养管理,减少诱因,降低发病损失:就本病表现出的一系列变化来说,从饲养管理上我们应该抓好如下几点:
由于心包积液会导致心脏压塞征,导致心跳加快而浅,供氧不足。
一切不利于氧气供应的因素对本病都有促进作用。而今年夏天热应激和突出的暑湿天气则加重了这一负担,这可能也是夏季容易发生本病而且今年发病率高、死亡率高的一个主要原因。因此:
一、在发病区、发病季节,注意养殖密度不要过大,甚至可以降低密度。这样鸡群的需要量能够充分供应,且温度容易调控。
二、注意夏季的热应激危害,注意通风降温,供给鸡只充足的新鲜空气,保证氧气供应。
三、密闭式鸡舍,注意负压不要过大,以防止鸡舍缺氧。必要时可适当加大进风口面积,加大风力风速。也可以使用正压通风,以保证氧气供应。
四、霉菌及其毒素的帮凶角色,对本病提供很大的助力,他会严重影响到肝肾功能,为本病推波助澜,因此,应正确地处理和面对这个问题。
由于本病是病毒性传染病,既然在夏季开始发病,那在其它季节也会有所发生,只是其致病力、发病率、死亡率、发病程度等会有所降低。由于夏季病毒性病发病率低,所以一般主要表现单纯发病,一旦进入秋冬季节,天气变化较大,病毒繁殖加快,则可能就会发生合并感染和继发感染,因此在今年秋季的陆续中就看到了不少流感、新城疫等的合并感染就多起来,由于合并感染的复杂性,所以出现了各种各样的病变,以致于一些人将安卡拉病的病变说的五花八门,有的甚至质疑本病是否是安卡拉病。其实那只是一些合并感染或继发感染导致的病变而已,如果发生合并感染和继发感染则发病程度更深,病变更复杂,发病率、死亡率更高,其治疗更显困难。很多人把这次安卡拉发病认为是大肠杆菌、流感、新城疫,就是因为这个原因。因此大家要正确认识安卡拉病以及合并感染和继发感染情况,以便对发病进行有效的治疗。
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