鸽伤寒沙门氏菌病的分离与鉴定

摘要:沙门氏菌病(Salmonellosis)是由肠杆菌科、沙门氏菌属中的一种或多种细菌引起的鸡、火鸡、鸭、鹅、珠鸡、雉鸡、鹌鹑、麻雀、鸽、金丝雀、孔雀等禽类疾病。年河北唐山龙辰鸽舍的鸽子发病,由零星发病发展至全群。其临床症状主要表现为食量减少,口腔分泌物增多,羽毛蓬松杂乱,排稀粪或绿色粪便;剖检可见腺胃出血,肝脏肿大呈苍白色、质地极脆易破裂,肠道出血、变黑,淋巴结肿大。经实验室诊断,确诊为鸽伤寒沙门氏菌病。

关键词:鸽、伤寒沙门氏菌、鸽场、鉴定

1前言

1.1引起鸽沙门氏菌病的病原

沙门氏菌属是一大属血清学相关的革兰氏阴性杆菌。根据《伯杰氏细菌分类学手册》第1卷(年),此属分为5个亚型,多个血清型。与兽医有关的沙门氏血清型大多属于第Ⅰ亚属中。我国发现近多个血清型。许多血清型都可以产生毒素,致使动物发病。其中引起禽类发病的病原体根据抗原结构不同包括三类:鸡白痢沙门氏杆菌引起鸡白痢,鸡伤寒沙门氏菌引起的称谓禽伤寒,一群可以运动的沙门氏菌引起的称谓禽副伤寒。可以引起鸽子发病的主要是鸡白痢和禽副伤寒,鸽子对鸡伤寒沙门氏菌不易感。

1.2鸽发生沙门氏菌病的临床症状

1、发病日龄:主要侵害雏鸽,以排白色糊状粪便为特征。发病率和死亡率很高。成年鸽呈慢性或隐形感染,成带菌状态,一般不发病。在一定应急因素的影响下,如:长途运输,长途竞翔比赛,营养不良体质虚弱,成年鸽也可发病。

2、发病病状:幼鸽出雏率低,往往有许多鸽蛋孵不出来,并且有的中途死亡;幼鸽出壳后,体质虚弱,多数脐带处闭合不好发生肺炎,断脐处红肿。出壳后4-5d开始发病死亡,1周左右发病和死亡达到高峰。最急性者,无明显症状突然死亡。病程稍长者表现精神不振,绒毛蓬松,翅膀下垂,离群蹲伏。进而腹泻,排白色浆糊状粪便,肛门周围羽毛被粪便污染,肝门处由于白色稀便干结后堵塞肛门处影响排便,病鸡长发尖叫声。有些病鸡出现眼盲,或肢关节肿胀和行,有些发生肺炎,出现呼吸困难。不经过药物治疗,病程一般4-7d。病死率高。耐过鸽成为带菌者,发育不良。

成年鸽多为隐性带菌,产蛋减少或停止产蛋。少数表现委顿下痢,产蛋停止。有些因卵黄囊炎引起腹膜炎,是腹膜增厚而呈“垂腹”现象。

1.3鸽发生沙门氏菌病的病理变化

急性死亡的雏鸽一般无明显病变。病程稍长者,在肝、心肌、脾、肺、肾、肌胃等有针尖大小的黄色坏死灶和灰白色结节,胆囊充盈,肝脏由于胆汁分泌受阻,导致肝脏呈绿色,俗称“青铜肝”。输尿管充满白色尿酸盐,肠道泄殖腔处充满白色粘稠的尿酸盐,盲肠有干酪样物阻塞肠腔,剖开后盲肠粘膜出血,内有白色伪膜性肠炎。常见腹膜炎。有的雏鸽有出血性肺炎,肺有症结节和灰白色肝变。有的肝肿至正常2-3倍,呈暗红或深紫色,有的略带土黄色,表面散在或弥漫小红色或黄白色坏死灶,质脆易碎。

成鸽主要病变在生殖系统。卵泡变性,呈绿色或灰绿色,卵膜变厚呈囊状,内含油脂或干酪样物。轻的卵泡充血、出血,有的卵泡脱离卵巢游离腹腔或粘附于腹膜上,引起腹膜炎和腹中脏器粘连。常有心包炎。睾丸肿大或缩小,有点状坏死灶,输精管闭塞。

2材料与方法

2.1.材料

2.1.1病料来源

河北唐山龙辰鸽舍发病死亡鸽子的肝脏、脾脏、心脏等。

2.1.2培养基

麦康凯琼脂、普通琼脂、三糖铁(TSI)琼脂、5%绵羊鲜血琼脂、半固体糖发酵培养基、营养肉汤、邓亨氏蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水。

2.1.3试剂及染液

靛基质试剂、M.R试剂、V-P试剂、革兰氏染液。

2.1.4药敏纸片

北京天坛药物生物技术开发公司,批号:。

2.1.5沙门氏菌属诊断血清

中国兽医药品监察所/北京中海生物科技有限公司生产,批号:。

2.1.6试验动物

小白鼠8只由北京实验动物研究中心提供。

鸽子8只由医院实验动物中心提供。

2.2方法

2.2.1细菌分离

无菌采取病料于鲜血琼脂平板上划线分离,37℃有氧条件下培养24h,取可疑菌落接种于营养肉汤,在划线于鲜血琼脂平板上,然后挑取单个菌落经涂片、革兰氏染色、镜检,证实为纯培养物,将其接种于鲜血琼脂斜面上进行培养,得到纯培养菌。

2.2.2细菌鉴定

2.2.2.1形态结构与染色特性

按常规方法对分离到的细菌进行形态结构与染色特性观察。

2.2.2.2培养特性

分离菌的培养物接种于普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、三塘铁琼脂斜面、营养肉汤等培养基中,37℃有氧条件下培养观察其生长表现。同时另一组置于厌氧罐中37℃条件下培养观察其生长表现。

2.2.2.3生化试验

用分离菌的纯培养物进行下列试验:糖发酵试验、靛基质试验、M.R试验、V-P试验、机缘酸盐利用试验等。

2.2.2.4运动性检查

按悬浮液滴显微镜法检查分离菌的运动性。

2.2.3药敏试验

按药敏纸片扩散法进行操作及判定。

2.2.4动物致病性试验

(1)小白鼠致病性试验:8只健康的小白鼠平均分为两组。试验组将纯培养菌接种于营养肉汤,37℃培养24h,麦氏比浊法测定其含菌量约为1.2×个/ml,然后腹腔接种小白鼠,每只0.2ml,对照组小白鼠腹腔注射灭菌普通肉汤0.2ml/只。对注射后的小白鼠隔离饲养,观察其发病及死亡情况,对死亡的立即剖检,观察其病理变化。然后无菌采取肝脏、脾脏等病料,涂片、革兰氏染色、镜检,并在鲜血琼脂平板上划线分离培养。(2)鸽子的致病性试验:8羽成年鸽子平均分为两组。实验组将纯培养菌接种于普通肉汤,37℃培养24h,麦氏比浊法测定其含菌量约为1.2×个/ml,然后口腔内服法接种4羽鸽子,0.5ml/羽。对照组4羽鸽子口服灭菌过的营养肉汤0.5ml。对接种前和接种后72h,无菌采取鸽子的粪便在麦康凯平板上划线,37℃培养24h,检查粪便中细菌的情况。

3结果

3.1细菌培养特性

分离菌为兼性厌氧菌,该菌在麦康凯琼脂上生长出细小、灰白色、透明、光滑、边缘整齐的小菌落;在普通琼脂上生长出灰白色、边缘整齐、表面光滑、凸起、湿润、呈露珠状的中等大小菌落;在5%绵羊鲜血琼脂上生长出不溶血的灰白色、光滑、凸起、边缘整齐的中等大小菌落;在营养肉汤中不形成菌膜和菌环,37℃、24h培养液表现为上液澄清、管底有少量沉淀,振摇后呈均匀浑浊。

3.1.1形态

待检菌为革兰氏阴性、两端钝圆的小直杆菌。

3.1.2生化特性

待检菌的生化特性鉴定结果见表1。

表1待检菌的生理生化特性

注:㈩为产酸产气,+为阳性,-为阴性。三塘铁上表现:“红色”为斜面的变化,“黄色”为底部的变化、“+”为产酸阳性、“-”为H2S阴性。

3.2血清型鉴定

待检菌经沙门氏菌多价因子血清鉴定,其O抗原为O1、O9。

3.3药敏试验

待检菌的药敏试验结果见表2。

3.4动物致病性试验

3.4.1小白鼠致病性试验

试验组小白鼠于感染后24h内死亡。死亡剖检可见肝脏肿大、出血,心脏、脾脏、肠壁等大部分内脏器官上均有出血点。将肝脏、脾脏涂片,革兰氏染色后发现有革兰氏阴性小杆菌。用肝脏、脾脏等组织在平板上划线分离,经鉴定其各项特性与接种菌相同。对照组小白鼠未见异常。

表2待检菌株的药敏试验结果

3.4.2鸽的致病性试验

试验组的4羽鸽子均于感染后48h左右开始发病,表现为精神沉郁,羽毛蓬松杂乱,拉稀粪。接种前采取的粪便在麦康凯平板上分离出红色的中等大小菌落,经鉴定是大肠杆菌。接种后72h采取的粪便在麦康凯平板上分离出两种菌,一种为红色的中等大小菌落,与接种前分离的菌相同;另一种为灰白色、细小圆整、表面光滑的小菌落,经鉴定是沙门氏菌。将鸽子处死剖检,可见肝脏肿大,肠壁有出血点。取肝脏涂片,革兰氏染色后发现有革兰氏阴性小杆菌;再用肝脏在麦康凯平板上划线分离,37℃培养24h后可见有一种灰白色、边缘整齐、表面光滑的小菌落,经鉴定是沙门氏菌,其各项特性与接种菌相同。对照组的鸽子饲养了7天,一直没有异常变化,将其处死剖检,也无异常病变。接种前、后采取的粪便在麦康凯平板上分离到的都是大肠杆菌,未见有可以细菌。

4总结

从送检的病死的鸽子体内分离出的一株细菌,通过生长特性、菌体形态、菌落特征、染色特性、生化试验、血清型鉴定等一系列的系统鉴定,证实所分离的细菌为鸡伤寒沙门氏菌。动物致病性试验表明此株菌有较强的致病性,血清型试验证明此株菌有O1、O9抗原。药敏试验证明该菌对丁胺卡那霉素、链霉素、头孢三嗪、卡那霉素、妥布霉素等敏感,而对氨苄青霉素、青霉素、万古霉素等不敏感。沙门氏菌对人和动物致病的血清型主要分属于A—F群。而对禽类致病的则主要是鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌,故本次血清型鉴定试验选择沙门氏菌A—F群多价O血清及其常见致病性鸡伤寒沙门氏菌O抗原O1、O4、O7、O9单因子血清来鉴定该分离菌株的血清型。鉴定结果,O1、O9单因子血清与待检细菌发生凝集。鸡伤寒沙门氏菌是危害家禽的一种重要的细菌性病原微生物,今年来随着养殖业的发展、特种养殖的不断出现,鸡伤寒沙门氏菌也开始感染特种禽类。针对这一情况,在饲养特种禽类的过程中,要加强饲养管理,有效的预防该病原的感染。鸡伤寒沙门氏菌病可以通过垂直传播和水平传播两种途径传播,并且对雏禽致死率高,给广大养殖户造成一定的经济损失。但是只要我们能做好种蛋的选择及其消毒工作,以及加强平时的各项消毒灭菌工作,本病是可以做到有效预防的。

4.1信鸽发生沙门氏杆菌的原因

由于野禽是禽沙门氏菌的携带者,在许多死亡的野禽尸体,粪便中都可以分离到病原。有时野禽自身并不发病,但是可以不断向外排泄出病原。信鸽容易与野禽接触,容易接触感染病原。此病既可垂直传播,又可水平传播。病鸽和带菌鸽是本病的主要传染源,病鸽的粪便中含有大量的病菌,健康鸽通过接触污染的饲料、饮水、用具经消化道感染。通过呼吸道、眼结膜、交配等途径也可感染。本病最重要的传播方式是经带菌蛋垂直传播。成鸽多为隐性感染,当有应激因素或抵抗力下降时,出现临床症状。此病也可以通过饲料、人员、用具传播。由于饲料加工,运输、储藏过程中受沙门氏菌病原污染,导致饲料中含有病原微生物,食用后导致发病。

4.2沙门氏菌病对信鸽所造成的危害

信鸽不同与其它经济动物的用途,饲养家禽以肉用为目的,饲养观赏动物以观赏为目的,饲养信鸽是为了能够参加信鸽竟翔比赛为目的。信鸽发生沙门氏菌病后往往造成多个器官发生器质性病变,失去其运动价值。沙门氏菌可以造成败血病,并且可以释放脂多糖内毒素,可使信鸽多个器官损伤。(1)沙门氏菌可以造成肝脏受到损伤。肝肿大、发黄,肝细胞坏死,肝脏散在针尖大的坏死灶。肝脏是产生肝糖原的器官,肝糖原是运动的主要能量物质。并且肝脏也是解毒代谢器官,机体运动时产生的有毒物质需要肝脏的解毒功能来实现。(2)沙门氏菌可以造成心脏受到损伤。病程较长的心肌细胞发生变性坏死。病雏心肌有灰白色增生结节,心脏发生心苞炎,心包膜增厚发白,心包液混浊。心脏是血液循环系统的动力器官,血液循环是机体供氧载体,机体运动需要大量的氧气参与机体代谢。心脏受到损伤往往造成供氧不足,导致运动成绩不佳。心脏不好时,剧烈运动可以造成猝死。(3)沙门氏菌可以造成肺脏肾脏和肺受到损伤。造成肺脏细胞坏死,肺有灰褐色结节,发生纤维素性肺炎。肺脏是机体与外界气体交换的器官,吸收氧气,排除有毒物质。肺脏受到损伤时,导致气体交换减少,吸收氧气少,向外排除废物减少。容易造成缺氧和自身中毒。肾脏是代谢排泄废物的器官,肾脏损伤,通过尿道排泄废物减少,容易造成自身中毒。(4)沙门氏菌可以造成生殖器官受到损伤。发病蛋鸡卵巢异常,卵巢发炎,卵泡萎缩、变形,呈褐绿色,钟摆状卵泡。由于卵巢炎而造成卵栓、腹膜炎、输卵管炎,输卵管膨大,内有干酪样物。输卵管堵塞,蛋排不出来。严重的卵巢坏死,产生不了卵子。公鸡出现睾丸炎,睾丸萎缩变硬,睾丸的输精小管完全闭塞,曲细精管内细胞变性、坏死,精子产生少或没有产生,睾丸散在小脓肿,精液质量差,死精多,精子活力低。受精率低。有的信鸽会终身丧失生育能力。(5)沙门氏菌可以造成消化系统受到损伤,十二指肠呈出血性炎,盲肠内有干酪样物,导致营养物质吸收不良,剧烈运动高强度的飞行比赛后,物质消化和吸收慢,营养物质和能量得不到及时补充,长期如此导致机体消瘦,肌肉发育不良。

通过以上叙述可知一羽心脏功能低下,肺功能不全,运动能量物质产生障碍的信鸽很难经受住长距离,高强度的飞行比赛,更不要说飞出好的成绩了。

4.3信鸽沙门氏菌的防制

信鸽发生沙门氏菌病后往往造成多个器官发生器质性病变,失去其运动价值所以对沙门氏菌病必须以预防为主,疫苗和药物的提前预防给药非常重要。

预防本病的原则是杜绝病原传入,清除群内带菌鸽与慢性患鸽,建立健康的种鸽群。

4.3.1建立健康鸽群

挑选健康种鸽、种蛋,建立健康鸽群,严防病原传入。引进种鸽、种蛋时,一定要来自健康鸽群,种鸽需隔离观察,经检疫确认不携带病原健康后才可混群。每次放飞回来后要隔离饲养观察,清洗鸽子体表;同时给予药物杀灭病原预防携带病原。

4.3.2定期检疫

鸽群要进行定期检疫,检出的阳性者立即淘汰,使鸽群逐步净化。加强环境消毒,并经常定期或不定期的消毒,加强种蛋的卫生管理。

4.3.3加强信鸽的孵化育种管理

尽量选时种蛋应来自健康种鸡群,作雏前给药,许多鸽友都有这方面的经验,作雏留种前都要清理一下呼吸道,驱一下体内的寄生虫。作雏时给一些杀灭沙门氏菌的药物,可以尽可能杜绝沙门氏菌通过产蛋的垂直传播。入孵前应用福尔马林对种蛋、巢穴、器具进行彻底熏蒸消毒,并且对器具的消毒最好每天一次。雏鸽出壳后应注意脐带伤口消毒,避免通过脐带伤口处感染,最好每天一次。

4.3.4预防

如果有条件的可以购买到信鸽沙门氏菌疫苗的,可以进行疫苗免疫注射,如果没有可以找相当产品进行替代,如用鸡的疫苗替代。也可定期药物预防,药物预防是控制本病的有效方法。出壳1—2d的雏鸽,可用0.01%高锰酸钾饮水。在发病日龄期间用治疗药物的一半剂量混于饲料和饮水中。为防止长期应用单一的药物预防引起耐药菌株的出现,应将各类药物交替使用。

4.3.5治疗

药物治疗可减少病鸽死亡,但不能清除带菌,可造成产蛋下降。磺胺类药物还可抑制鸽的生长。痢特灵按0.02%--0.04%拌料,一日龄起连用两周;磺胺增效剂与磺胺按1:5混合,再按0.02%的比例拌料,连用2周;土霉素按0.3%或氯霉素按0.5%拌料,连用10d;庆大霉素IU/只,饮水5d。其他药物如环丙沙星,恩诺沙星、氟苯尼考等新型药物安全性高,效果好。用药前最好进行药敏试验,选择最敏感的药物可收到最好的效果。

4.3.6特别提示

沙门氏菌病属于细菌性疾病,在目前抗菌素和生物制品非常先进的今天,如果提前预防和治疗是可以控制的。平时也遇到许多鸽友反映自己的鸽子有排白色粪便的症状出现,以为是沙门氏菌病,用了多种抗生素,不见效果。其实排白色粪便的病因很多,不一定都是沙门氏菌病。排白色粪便这种症状是一个病理现象,简单的说,当信鸽发生疾病时,体内蛋白代谢发生紊乱,导致尿酸盐产生增多就会出现排白色粪便。当用多种抗生素后,如果症状没有减轻,基本上可以排除沙门氏菌病,因为药物治疗也是临床诊断的手段之一。所以当用药无效后应当找专业人士咨询诊断,以免耽误病情。

参考文献(略)

宠物医师网全新改版上线,敬请浏览。

张鹏飞

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